AAT Bioquest  22838  細(xì)胞計(jì)™ PE-Annexin V 結(jié)合細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒 *針對(duì)流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行了優(yōu)化*

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AAT Bioquest 結(jié)合細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒-常備現(xiàn)貨

美國(guó) AAT Bioquest Inc.(前身是 ABD Bioquest，Inc.)是一家為從事生命科學(xué)研究、診斷研發(fā)及藥物開發(fā)的科學(xué)家研發(fā)、生產(chǎn)和銷售生物分析研究試劑和試劑盒的公司。公司致力于光譜學(xué)檢測(cè)領(lǐng)域，包括吸收（顏色），熒光和發(fā)光技術(shù)。AATBioquest 的產(chǎn)品幫助 quan shi jie 的科學(xué)家和生物醫(yī)藥研究者更好的了解生物化學(xué)，免疫學(xué)，細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)等領(lǐng)域。AAT Bioquest 會(huì)不斷介紹新產(chǎn)品，快速的豐富各個(gè)領(lǐng)域的產(chǎn)品。

AAT Bioquest  22838  細(xì)胞計(jì)™ PE-Annexin V 結(jié)合細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒 *針對(duì)流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行了優(yōu)化*  100Tests，產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

產(chǎn)品品牌：AAT Bioquest

產(chǎn)品貨號(hào)：22838

產(chǎn)品名稱：細(xì)胞計(jì)™ PE-Annexin V 結(jié)合細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒 *針對(duì)流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行了優(yōu)化*

產(chǎn)品規(guī)格：100Tests

AAT Bioquest 結(jié)合細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒-常備現(xiàn)貨 

AAT Bioquest  22838  細(xì)胞計(jì)™ PE-Annexin V 結(jié)合細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒 *針對(duì)流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行了優(yōu)化*  100Tests，產(chǎn)品說明：

膜聯(lián)蛋白V可與包括PE在內(nèi)的熒光染料偶聯(lián)。這種形式保留了其對(duì)磷脂酰絲an酸（PS）的高親和力，因此可作為正在經(jīng)歷細(xì)胞凋亡的細(xì)胞流式細(xì)胞術(shù)分析的靈敏探針。由于PS的外化發(fā)生在細(xì)胞凋亡的早期階段，因此PE膜聯(lián)蛋白V染色可以在比基于核變化（如DNA片段化）的測(cè)定更早的階段識(shí)別細(xì)胞凋亡。PE膜聯(lián)蛋白V染色先于膜完整性的喪失，伴隨著由凋亡或壞死過程引起的細(xì)胞死亡的最新階段。因此，PE膜聯(lián)蛋白V染色通常與重要染料（如碘化丙啶（PI）或7-氨基放線菌素（7-AAD））結(jié)合使用，以使研究者能夠識(shí)別早期凋亡細(xì)胞（7-AAD陰性，PE膜聯(lián)蛋白V陽(yáng)性）。具有完整膜的活細(xì)胞排除7-AAD，而死亡和受損細(xì)胞的膜可滲透7-AAD。例如，被認(rèn)為是活的細(xì)胞是PE膜聯(lián)蛋白V和7-AAD陰性，而處于早期細(xì)胞凋亡的細(xì)胞是PE膜聯(lián)蛋白V陽(yáng)性和7-AAD陰性，而晚期細(xì)胞凋亡或已經(jīng)死亡的細(xì)胞都是PE膜聯(lián)蛋白V和7-AAD陽(yáng)性。該測(cè)定不區(qū)分經(jīng)歷凋亡死亡的細(xì)胞和因壞死途徑而死亡的細(xì)胞，因?yàn)樵谌魏我环N情況下，死細(xì)胞都會(huì)用PE膜聯(lián)蛋白V和7-AAD染色。然而，當(dāng)隨著時(shí)間的推移測(cè)量細(xì)胞凋亡時(shí)，通常可以從PE膜聯(lián)蛋白V和7-AAD陰性（活或無可測(cè)量的細(xì)胞凋亡）到PE膜聯(lián)蛋白V陽(yáng)性和7-AAD陰性（早期細(xì)胞凋亡，膜完整性存在），最后到PE膜聯(lián)蛋白V和7-AAD陽(yáng)性（終末期細(xì)胞凋亡和死亡）。細(xì)胞通過這三個(gè)階段的運(yùn)動(dòng)表明細(xì)胞凋亡。相比之下，表明細(xì)胞既是PE膜聯(lián)蛋白V陽(yáng)性又是7-AAD陽(yáng)性的單一觀察本身揭示了關(guān)于細(xì)胞經(jīng)歷死亡過程的信息較少。

組件

組分A：RPE-膜聯(lián)蛋白V—1瓶

組分B：測(cè)定緩沖液（4°C）—1 瓶 （50 mL）

組件C：100X核紅色DCS™—1 瓶 （100 μL）

1.    用測(cè)試化合物制備細(xì)胞（200 μL/樣品）

2.    添加 RPE-膜聯(lián)蛋白 V 檢測(cè)溶液

3.    在室溫下孵育 20 - 60 分鐘

4.    使用575/26 nm濾光片（PE通道）的流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞

儲(chǔ)備液的制備

除非另有說明，否則所有未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)分成一次性等分試樣，并在制備后儲(chǔ)存在-20°C。避免反復(fù)凍融循環(huán)。

1. RPE-膜聯(lián)蛋白 V 儲(chǔ)備溶液 （100X）：

將 200 μL PBS 和 0.2% BSA 加入 RPE-膜聯(lián)蛋白 V 小瓶（組分 A）中，制成 100X RPE-膜聯(lián)蛋白 V 儲(chǔ)備溶液。注意：將重組的 100X RPE-膜聯(lián)蛋白 V 儲(chǔ)備溶液儲(chǔ)存在 4°C。 不要凍結(jié)。

實(shí)驗(yàn)方案樣本

1.    用測(cè)試化合物處理細(xì)胞所需的時(shí)間（用星形孢菌素處理的Jurkat細(xì)胞為4-6小時(shí)）以誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。注意：貼壁細(xì)胞的膜聯(lián)蛋白V流式細(xì)胞術(shù)分析不常規(guī)測(cè)試，因?yàn)樵诩?xì)胞分離或收獲過程中可能發(fā)生特定的膜損傷。然而，利用膜聯(lián)蛋白V對(duì)貼壁細(xì)胞類型進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)的方法先前已由Casiola-Rosen等人和van Engelend等人報(bào)道。

2.    離心細(xì)胞得到 1 - 5 × 10⁵細(xì)胞/管。

3.    將細(xì)胞重懸于 200 μL 檢測(cè)緩沖液（組分 B）中。

4.    向細(xì)胞中加入 2 μL 100X RPE-膜聯(lián)蛋白 V 儲(chǔ)備溶液。

5.    自選：加入 2 μL 100X 核紅™ DCS（組分 C）用于壞死細(xì)胞。

6.    在室溫下孵育 20 至 60 分鐘，避光。

7.    可選：在使用流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞之前，加入 200 至 300 μL 檢測(cè)緩沖液（組分 B）以增加體積。

8.    使用帶有575/26nm濾光片（PE通道）的流式細(xì)胞儀監(jiān)測(cè)RPE-膜聯(lián)蛋白V的熒光強(qiáng)度。當(dāng)將核紅色™ DCS添加到細(xì)胞中時(shí)，使用660 / 20 nm濾光片（APC通道）測(cè)量細(xì)胞活力。

產(chǎn)品訂購(gòu)信息：

22838  細(xì)胞計(jì)™ PE-Annexin V 結(jié)合細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒 *針對(duì)流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行了優(yōu)化*  100Tests